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中国农科院哈尔滨兽医研究所研发现场快速检测非洲猪瘟方法倒提壶

2022-09-09 10:14:37  檀州农业网

中国农科院哈尔滨兽医研究所研发现场快速检测非洲猪瘟方法

近日,中国农科院哈尔滨兽医研究所生物技术重点实验室猪烈性传染病团队在非洲猪瘟研究方面取得重要进展,建立了交叉引物扩增结合免疫层析条(CPA-strip)快速检测ASFV的方法。相关研究成果以“Cross-primingamplificationcombinedwithimmunochromatographicstripforrapidon-sitedetectionofAfricanswinefevervirus”为题,发表在国际著名学术期刊SensorsandActuatorsB:Chemical。通讯作者是团队首席科学家仇华吉研究员,高瑶、孟星宇、张华伟并列文章第一作者。

研究背景:

非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)引起猪的一种烈性、高度接触性传染病,引起猪的死亡率可高达100%,与传统猪瘟相似且综合症状复杂难辨。ASFV属非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属,是一种有囊膜的双链DNA病毒,也是唯一的虫媒DNA病毒。

中国将非洲猪瘟列为一类动物疫病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病。近年来,中国周边国家格鲁吉亚、亚美尼亚、阿塞拜疆、俄罗斯、乌克兰等国先后发生多起非洲猪瘟疫情。今年8月以来我国发生首例非洲猪瘟疫情以来,已相继有12个省(直辖市)报道非洲猪瘟疫情,当前中国对非洲猪瘟的防控形势十分严峻,这就使得掌握ASF的简便、快速精确的现场诊断方法变得尤为重要。

截至2018年10月29日全球非洲猪瘟疫情

截至10月29日,全球有37个国家和地区向OIE报告发生非洲猪瘟疫情,其中13个国家已经根除。2018年新发生疫情的国家包括匈牙利(4月)、保加利亚(8月)、中国(8月)、比利时(9月)。

2018年以来,全球有波兰、俄罗斯、拉脱维亚、捷克、罗马尼亚、摩尔多瓦、乌克兰、匈牙利、保加利亚、比利时、科特迪瓦、南非、乍得、赞比亚和中国等15个国家发生4183起非洲猪瘟疫情。

结果速览

本研究中,分析了ASFV毒株的p54基因序列,选择高度保守的区域设计引物和探针,以确保所有基因型都能被检测。生物素和FITC分别标记在特异引物的5’端作为探针,在CPA扩增之后,产物的两端分别与FITC和生物素连接,然后通过嵌入在测试条、测试线以及对照线上的抗体进行鉴定,以指示检测结果。CPA技术不需要专门的设备,反应时间也大大减少。

试验操作不需要专业的实验室和人员,并且程序易于执行。采用该CPA方法检测来自乌干达的临床样本时,与高灵敏度的实时PCR技术结果高度一致(44/45)。在CPA条带中,只有一个样品经实时PCR检测阳性(CT值=34),而CPA方法为阴性。综上所述,建立的一种以P54基因为靶点与免疫层析试纸条(CPA条)相结合的ASFVCPA条带检测法特异性强、灵敏度高、简便易行、成本低,对ASF有可靠的监测潜力。

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