台湾地区拟制定食品中氯霉素类抗生素残留量的检验方法

2014年3月13日，台湾地区"卫生福利部"发布部授食字第1031900266号公告，预告制定"食品中动物用药残留量检验方法-氯霉素类抗生素之检验"草案，20日内接收公众意见或建议。

食品中动物用药残留量检验方法-氯霉素类抗生素之检验草案

1. 适用范围：本检验方法适用于农畜禽水产品之肌肉、蛋类、内脏、乳汁及蜂蜜中氯霉素（chloramphenicol）、甲磺氯霉素（thiamphenicol）、氟甲磺氯霉素（florfenicol）及氟甲磺氯霉素胺（florfenicol amine）之检验。

2. 检验方法：检体经萃取及净化后，以液相层析串联质谱仪（liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）分析之方法。

2.1. 装置：

2.1.1. 液相层析串联质谱仪：

2.1.1.1. 离子源：电洒离子化（electrospray ionization, ESI）。

2.1.1.2山鼠李. 层析管：XSELECT HSS PFP,2.5 μm,内径 2.1 mm × 10 cm ,或同级品。

2.1.2. 离心机（Centrifuge）：可达3200 × g以上者。

2.1.3. 振荡器（Shaker）。

2.1.4. 均质机（Homogenizer）。

2.1.5. 氮气蒸发装置（Nitrogen evaporator）。

2.1.6. 固相真空萃取装置（Solid phase extraction vacuum manifolds）。

2.1.7. 旋涡混合器（Vortex mixer）。

2.2. 试药：甲酸与甲醇均采用液相层析级；正己烷、乙酸乙酯、氨水（30%）、三氯醋酸（trichloroacetic acid）及醋酸均采用试药特级；去离子水（比电阻于 25℃ 可达 18 MΩ/cm以上）；氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺对照用标准品；chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素内部标准品。

2.3. 器具及材料：

2.3.1. 容量瓶：1 mL及100 mL.

2.3.2. 离心管：50 mL,PP材质。

2.3.3. 固相萃取匣（Solid phase extraction cartridge）：Oasis MCX,6 mL,150 mg,或同级品。

2.3.4. 滤膜：孔径0.22 μm,PVDF材质。

2单枝竹.4. 试剂调制

2.4.1. 50%甲醇溶液：

取甲醇50 mL,加去离子水使成100 mL.

2.4.2. 5%醋酸溶液：

取醋酸5 mL,加去离子水使成100 mL.

2.4.3. 5%三氯醋酸溶液：

称取三氯醋酸50 g,以去离子水溶解使成1000 mL.

2.4.4. 含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液：

取氨水20 mL,加乙酸乙酯使成1000 mL.

2.4.5. 含3%氨水之甲醇溶液：

取氨水10 mL,加甲醇使成100 mL.

2.4.6. 25%甲醇溶液：

取甲醇25 mL,加去离子水使成100 mL.

2.5. 移动相溶液之调制：

2.5.1. 移动相溶液A:

取甲酸1 mL,加去离子水使成1000 mL,以滤膜过滤，取滤液供作移动相溶液A.

2.5.2. 移动相溶液B:甲醇。

2.6. 标准溶液之配制：

取氯霉素、甲磺氯霉素、氟甲磺氯霉素及氟甲磺氯霉素胺对照用标准品各约10 mg,?确称定，分别以50%甲醇溶液溶解并定容至100 mL,作为标准原液，于 -20℃ 贮存。临用时分别取适量各标准原液混合，以50%甲醇溶液稀释至0.003~2.5 mg/mL,供作标准溶液。

2.7. 内部标准溶液之配制：

取chloramphenicol-d5、thiamphenicol-d3、florfenicol-d3及florfenicol amine-d3同位素内部标准品各约10 mg,?确称定，共置于100 mL容量瓶中，以50%甲醇溶液溶解并定容，供作内部标准溶液，于 -20℃ 贮泡花树属存。

2.8. 检液之调制：

2.8.1. 萃取：

2.8.1.1. 肌肉：

将检体细切均质后，取约5 g,精确称定，置于离心管中，加入内部标准溶液50 mL及含0.6%氨水之乙酸乙酯溶液20 mL,旋涡混合1分钟，振荡10分钟，以3200×g离心10分钟，取上清液。加入5%醋酸溶液2 mL,旋涡混合1分钟，取下层液，于45℃水浴中以氮气浓缩至约2 mL,加入5%醋酸溶液4 mL,旋涡混合后，供净化用。

2.8.1.2. 蛋与内脏：

将检体混匀后，取约5 g,精确称定，置于离心管中，加入内部标准溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋涡混合1分钟，振荡10分钟，以3200×g离心10分钟，取上清液，加入正己烷20 mL,旋涡混合1分钟，以3200×g离心5分钟，取下层液供净化用。

2.8.1.3. 乳汁：

将检体混匀后，精确量取5 mL,置于离心管中，加入内部标准溶液50 mL及5%三氯醋酸溶液20 mL,旋涡混合1分钟，振荡10分钟，以3200×g离心10分钟，取上清液供净化用。

2.8.1.4. 蜂蜜：

将检体混匀后，取约5 g,精确称定，置于离心管中，加入内部标准溶液50 mL及5%醋酸溶液10 mL,旋涡混合1分钟，振荡10分钟，供净化用。

2.8.2. 净化：

取2.8.1.节供净化用溶液，注入预先以甲醇5 mL及去离子水 5 m L润洗之固相萃取匣，弃流出液，以5%醋酸溶液5 mL流洗，弃流出液，再以含3%氨水之甲醇溶液5 mL冲提，收集冲提液，于45℃水浴中以氮气浓缩至干，再以25%甲醇溶液定容至1 mL,经滤膜过滤后，供作检液。

2.9. 基质匹配检量线之制作：

取空白检体，不添加内部标准溶液，依2.8.节萃取、净化及以氮气浓缩至干后，分别添加不同浓度标准溶液0.5 mL及内部标准溶液50 mL,再以去离子水定容至1 mL,经滤膜过滤后，依下列条件进行液相层析串联质谱分析。就各氯霉素类抗生素与内部标准品之波峰面积比，与对应之各氯霉素类抗生素浓度，制作基质匹配检量线。

液相层析串联质谱测定条件（注）：

层析管：XSELECT HSS PFP,2.5 μm,内径2.1 mm × 10 cm.

移动相溶液：A液与B液以下列条件进行梯度分析

更多检测方法请见：http://www.xmtbt-sps.gov.cn/detail.asp?id=45928